OTIMIZAÇÃO DE PROTOCOLOS DE EXTRAÇÃO DE RNA EM DIFERENTES TECIDOS DE MILHO

Abstract

Neste trabalho, foram testados cinco métodos de extração de RNA (CTAB microextração (Chang et al., 1993), Concert™ Invitrogen, Concert™ Adaptado, TRI Reagente® Sigma e TRI Reagente® Adaptado), em dois diferentes tecidos de milho (mesocótilo e raiz), com o objetivo de estabelecer um método eficiente de extração de RNA, visando posteriormente estudos de expressão gênica. Observou-se que o método Concert ,utilizando o protocolo adaptado, foi o mais eficiente para a extração de RNA de ambos os tecidos de plântulas de milho, originando 2351,35 µg por 100 mg de tecido para mesocótilo e 893,75 µg por 100 mg de tecido para raiz, considerando tanto a quantidade como a qualidade das amostras, podendo ser submetidas às etapas posteriores de tratamento com DNAse e construção de cDNA para estudos de expressão gênica. Pôde-se observar que pequenas modificações nos protocolos, como, por exemplo, mudança no tempo e na posição dos tubos durante a incubação e o incremento de duas lavagens com clorofórmio, podem melhorar muito tanto a qualidade quanto a quantidade do RNA extraído.